PCR und qPCR
1. Probenvorbereitung
Die Vorbereitung von Proben für die PCR oder qPCR erfordert in der Regel die Extraktion und Reinigung des Kernmaterials. Je nach Probenquelle kann dies eine mechanische Manipulation durch Homogenisierung beinhalten oder die Verwendung von Harzen oder Beads erfordern, um die Nukleinsäuren vor der Reinigung zu binden. Bereiten Sie Ihre Proben mit Hilfe von DNA- und RNA-Extraktions-, Isolierungs- und Aufreinigungskits sowie Reagenzien, Puffern und mehr vor.
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2. PCR-Amplifikation
Bei der Amplifikation werden ein DNA-Segment, Polymerase, Nukleotidlösung und Primer in einem PCR-Gefäß oder einer Mikroplatte kombiniert. Mit einem Thermocycler werden die folgenden Schritte durchgeführt, wobei der Prozess 35 bis 40 Mal wiederholt wird.
Denaturierung: Wasserstoffbrücken werden gebrochen, die DNA wird aufgespalten.
Tempern: Primer und Polymerase binden sich an die DNA.
Verlängerung: Nukleotide verbinden sich mit der DNA und bilden einen neuen komplementären Strang.
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3. qPCR Umgekehrte Transkription
Bei der Echtzeit-PCR wird die RNA in cDNA umgewandelt und dann mittels PCR amplifiziert. Gängige Echtzeit-PCR-Anwendungen weisen exprimierte Gene nach, untersuchen Transkriptvarianten und erstellen cDNA-Vorlagen für Klonierungs- und Sequenzierungsverfahren. Nachstehend finden Sie Polymerasen, Oligonukleotide, Mastermixe und vieles mehr zur Unterstützung Ihrer Echtzeit-PCR-Assays.
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4. qPCR-Quantifizierung
Die Echtzeit-PCR wird zum Nachweis spezifischer DNA-Sequenzen verwendet. Bei dieser Methode werden Fluoreszenzfarbstoffe oder Sonden verwendet, um die Menge des amplifizierten Materials in Ihrer Probe zu bestimmen. Hier finden Sie eine Vielzahl von Mastermixen sowie Echtzeit-PCR-Geräte, Assays und Kits zur Quantifizierung Ihrer qPCR-Ergebnisse.
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5. Unverzichtbare Vorräte
Finden Sie HEPA-gefilterte PCR-Gehäuse, um kontaminierende Partikel von Ihrem Arbeitsbereich fernzuhalten. Kaufen Sie PCR-Einweggefäße und -Gefäßstreifen, Nukleinsäure-Mikrotiterplatten, PCR-Gehäuse und andere Laborgeräte, die zertifiziert frei von DNAse, RNAse, DNA und anderen potenziellen Kontaminanten sind.
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